克服耐药及免疫逃逸! 中山大学附属肿瘤医院发文：一种极具前景的透明细胞肾细胞癌解决方案

近日，中山大学附属肿瘤医院研究团队在期刊《Journal for ImmunoTherapy of Cancer》上发表了研究论文，题为“Affinity-optimized bispecific CAR-T cells targeting HLA-G and CD70 for the treatment of clear cell renal cell carcinoma”，本研究中，HLA-G 和 CD70 被鉴定为克服透明细胞肾细胞癌（ccRCC）异质性的理想双特异性CAR-T靶点。研究人员获得了一种对 HLA-G 结合亲和力增强的 ILT4 突变体。由此高亲和力ILT4突变体衍生的HLA-G CAR展现出更强的抗原特异性细胞毒性。随后，通过优化的(G4S)2连接肽将亲和力优化后的ILT4突变体与CD70纳米抗体连接，构建出一种HLA-G/CD70双特异性CAR。为避免因CD70表达导致的双特异性CAR-T细胞自相残杀，研究人员在载体中引入了CD70 shRNA。该双特异性CAR分别对两种抗原表现出特异性细胞毒性，并对双阳性肿瘤细胞介导了显著的抗肿瘤活性。双特异性CAR-T细胞在体内能有效抑制异质性肿瘤生长，且相比单靶点CAR-T细胞表现出更低的耗竭程度。

转移性透明细胞肾细胞癌现有治疗耐药困境与创新策略研发需求

01

肾细胞癌（RCC）是一种常见的恶性肿瘤，其中透明细胞肾细胞癌（ccRCC）是最常见的亚型。目前治疗RCC的标准方法包括手术切除以及免疫检查点抑制剂（ICIs）和酪氨酸激酶抑制剂为基础的靶向治疗等全身性干预手段。然而，相当一部分患者在初次诊断时即已出现转移性ccRCC，导致根治性手术无法实施。对于晚期转移性疾病，患者的生存预后仍然较差。现有疗法中常出现原发性和获得性耐药现象，凸显了开发创新治疗策略的迫切需求。

HLA-G/CD70双特异性CAR-T细胞在体内可对异质性肿瘤发挥细胞毒性作用

02

对肿瘤浸润淋巴细胞进行的流式细胞术分析显示，与单靶点CAR-T细胞相比，双靶点CAR-T细胞在肿瘤组织中的积累程度要高得多。外周血检测显示，双特异性细胞的数量出现显著增加，这一趋势在14天时达到峰值，并持续到28天；而单靶点细胞的数量则增长缓慢，且很快就会减少。这种更强的持久性很可能源于对两种抗原亚型的双重识别，从而避免了在仅针对单一靶标进行持续刺激时所导致的激活诱导性耗竭现象。事实上，这类双特异性CAR-T细胞表现出较低的耗竭标志物表达水平，且PD-1蛋白的数量也较少。接下来，研究人员利用混合ACHN细胞系模型，评估了在低抗原密度条件下双特异性CAR-T细胞的治疗效果。同样地，双特异性CAR-T细胞对那些抗原表达水平较低的异质性肿瘤也表现出强大的抗肿瘤活性，能够显著抑制肿瘤生长。相比之下，单特异性CAR-T细胞仅能暂时控制肿瘤生长，随后就会迅速出现复发。在该模型中，双特异性CAR-T细胞也表现出更强的肿瘤内浸润能力，同时降低了各种与疲劳相关的标志物水平，包括程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）、T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域相关蛋白3（TIM-3），以及淋巴细胞活化基因3，以及CD69和GZMB表达水平升高，这些结果共同表明这类CAR-T细胞具有更强的活化能力与细胞杀伤能力。此外，在实验结束阶段还采集了小鼠的各大器官，通过详细的组织病理学分析发现，所有被检测的器官中均不存在组织损伤或异常的免疫细胞浸润现象，这进一步证明了这类CAR-T细胞具有良好的安全性。

总体而言，本研究结果表明，基于(G4S)2的HLA-G/CD70双特异性CAR-T细胞能够有效且持续地清除那些具有不同HLA-G/CD70表达水平的ccRCC肿瘤。

HLA-G/CD70双特异性CAR-T细胞可有效抑制体内异质性ccRCC肿瘤的生长

结论

03

综上，研究人员利用经过亲和力优化的ILT4结构域以及CD70 VHH纳米抗体，设计出了一种用于治疗ccRCC的HLA-G/CD70双特异性CAR-T细胞。(G4S)2连接子使得这种双特异性CAR-T细胞具备高效的双靶点杀伤能力。通过克服抗原的异质性，这一策略不仅能够维持治疗效果，还能降低因抗原逃逸而导致的复发风险。鉴于HLA-G与CD70在多种侵袭性实体瘤中均存在共表达现象，这种双特异性策略具有较高的应用可行性，可广泛应用于临床。（转化医学网360zhyx.com）

参考资料：

https://jitc.bmj.com/content/14/10/e015799

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