流式细胞术在受体占位分析中的应用

一、引言

研发靶向细胞膜分子的蛋白类治疗药物时，靶标结合是新药开发成功的核心要素，但很难直接在体内观测药物与靶点的相互作用。基于流式细胞术、成像等技术测得的受体占有率（RO）可实现该检测；其中流式细胞术尤其适用于单克隆抗体等生物药，这类药物大多靶向细胞表面受体。若研究靶点位于易采集的循环细胞上，检测受体占有率即可直观反映药物与靶点结合情况。

尽管受体占据实验原理简单，却是开发难度最高的流式检测方法之一，难点主要来源于三方面：

● 靶点层面：抗原低表达、靶细胞稀有、给药后受体发生调控、存在可溶性靶点；

● 试剂层面：缺少可交叉结合靶标的商品化试剂、需自制检测试剂；

● 样本层面：疾病人群样本获取受限、样本稳定性差。

二、受体占据试验的三类检测模式

受体占据实验共分为三类检测模式，同时均可用于监测药物结合后发生的受体调控（受体上调、下调、内吞、膜受体脱落释放等）：

（1）已结合受体检测（Bound Receptor）

使用荧光标记的抗治疗药物单克隆抗体，直接识别结合在受体上的药物。

适用场景：缺少靶向受体的特异性抗体；或治疗药物直接荧光标记后会丧失结合活性。

可搭配非竞争性荧光抗体，同步单独检测总受体水平。

（2）游离受体检测（Free Receptor）

定量未被药物占据的空白受体，有两种实现方案：

● 竞争性抗体：与治疗药物竞争受体同一抗原表位，仅能结合未被药物占据的受体；

● 荧光标记药物：仅结合空白游离受体。

（3）总受体检测（Total Receptor）

定量细胞表面全部受体总量，两种实现方案：

● 非竞争性抗体：结合受体上与药物作用位点不同的抗原表位，不受药物结合与否影响；

● 过量药物饱和：样本中加入超量药物完全占据全部受体，再用荧光抗药抗体定量总受体。

三、实验模式选择依据

需结合药物作用机制（MOA） 与试剂可获得性综合判断：

● 若药物作用机制为阻断受体配体结合：优先选择游离受体实验；

● 无合适竞争性试剂时：采用已结合受体检测，结合总受体数值换算游离受体占比；

● 药物机制涉及调控受体表达、或清除靶细胞：优先开展总受体检测。

四、受体占据实验的设计与开发

五、受体占据实验的方法学验证

受体占据实验数据用于企业内部决策与药品监管申报，必须完成全面验证，充分证明实验适配预期用途；多中心全球临床试验需额外开展方法转移验证。核心验证指标：线性、精密度、样本稳定性；根据使用场景补充定量下限、质控品范围、特异性等项目。

六、迈杰实验室相关经验

迈杰转化医学聚焦免疫治疗、靶向治疗及化疗相关领域，为客户提供覆盖药物研发与临床应用全流程的生物标志物一站式检测服务。其中流式平台不仅在细胞治疗领域提供出色的PK,PD检测服务，也在抗体药领域提供免疫分型，受体占位等检测服务。为创新药物的临床转化和精准用药决策提供坚实的技术支撑。实验室具备单抗药物，融合蛋白和双抗药物的受体占位开发和验证能力。

参考文献

[1]Selliah, N., et al. (2023). Flow cytometry method validation protocols. Current Protocols, 3, e868. doi:10.1002/cpz1.868

[2]Cabanski, M., Oldaker, T., Stewart, J. J., Selliah, N., Eck, S., Green, C., Litwin, V., & Vitaliti, A. (2021). Flow cytometric method transfer: Recommendations for best practice. Cytometry Part B: Clinical Cytometry, 100(1), 52-62. doi: 10.1002/cyto.b.21971

[3]Moulard, M and Ozoux, M.-L. How Validated Receptor Occupancy Flow Cytometry Assays Can Impact Decisions and Support Drug Development. Cytometry Part B 2016; 90B: 150–158.

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