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【新品】迈迪安2023年首个新品隆重上市:高浓度/可冻干T4 DNA连接酶

首页 » 产业 » 快讯 2023-02-09 转化医学网 赞(7)
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导读
2023首个新品无甘油连接酶全球上市!
迈迪安2023年度首个开年新品
无甘油T4 DNA连接酶(HC)
于1月16日全球上线
什么是连接酶?
连接酶是细胞中 DNA 复制所必需的几种关键酶之一,其作用是催化在双链 DNA 分子其中一条链上的核苷酸之间形成磷酸二酯键。DNA 连接酶能够使一条链上的 5’ 磷酸基团与另一条链的相邻 3’ -OH 基之间形成共价连接。该反应的重要性不仅在于能连接核苷酸分子(在 DNA 复制过程中),而且还能修复 DNA 损伤。
DNA连接酶根据辅因子的不同,可分为2类:ATP依赖的连接酶和NAD+依赖的连接酶。
T4 DNA连接酶是首个被发现的ATP依赖的DNA连接酶 (即其反应需要ATP作为辅助因子)。
T4 DNA 连接酶
在酶切实验中,内切酶的限制性消化产生两种类型的 DNA 末端,即粘性末端或钝端。
T4 DNA连接酶可催化双链DNA或RNA中相邻的5 ’磷酸基和3 ’羟基之间形成磷酸二酯键。
T4 DNA连接酶提取自T4噬菌体,是DNA重组技术中最常用的DNA连接酶之一,是研究实验室最好的酶之一,因为它比大肠杆菌提取的DNA连接酶具有巨大的优势,能有效地连接钝端或黏性末端,并修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交链中的单链缺口,而大肠杆菌DNA连接酶只能连接DNA-DNA分子。
连接酶的应用
连接酶在生物技术中最主要的应用在:
1)基因工程-DNA重组和克隆
2)基因测序
基因重组和克隆
基因表达实验从将感兴趣的基因克隆到质粒中开始。为此必须将感兴趣的基因连接到质粒中。质粒经过内切酶限制性酶切反应后产生黏性末端,T4 DNA 连接酶可以非常有效地将感兴趣的基因片段插入质粒酶切部位,连接 dsDNA 的粘性末端。
基因测序
在二代测序文库构建过程中,需要将人为构建的接头连接至PCR产物上,才能固定至测序芯片上的flowcell上完成测序。其中TA克隆连接接头建库是很常见的技术手段,待测序DNA片段在5'端磷酸化和3'端加“A”后,与带“T”黏性末端的接头互补配对,从而形成一个可上机测序的完整双链。
在进行TA连接时,不同样本类型或核酸片段结构的复杂程度都会影响到连接的效率,因此不同平台的接头也会有所影响,而连接效率会直接影响最终文库的产出。
迈迪安T4连接酶
迈迪安提供的无甘油T4 DNA连接酶核心优势:
无外切酶或内切酶活性
无甘油T4 DNA连接酶(HC)经过高度纯化和测试,确保无任何可能影响该酶连接效率的外切酶或内切酶活性。经过测试,该酶在冻干过程中和常温储存期间没有酶活损失。
无甘油T4 DNA连接酶(HC)与1μg HindIII酶切的λ 质粒DNA(第2&3道)和pUC19 质粒 DNA (第5 & 6道)在37°C下孵育16小时。结果显示,无甘油T4 DNA连接酶(HC)没有检测到外切酶和内切酶活性。
无甘油、可冻干
迈迪安提供的 T4连接酶不含甘油,可通过冻干制备成常温稳定的检测,是用于POC仪器卡壳中的理想选择。
330个单位的T4 DNA连接酶被用于评估其连接750 ng HindIII酶切的λ 质粒DNA的效率,在常温下进行10分钟的标准连接反应,随后在琼脂糖凝胶上进行检测,使用 ImageJ 软件评估相对于T4 DNA连接酶(T0)的连接效率。结果显示,无甘油T4 DNA连接酶(HC)是一种活性较高的酶,其不受冻干的影响,并在水化后保有完整活性。
高浓度,适用于微流控
迈迪安提供的无甘油T4 DNA连接酶(HC)的浓度(Weiss Units)比其他市售连接酶的浓度高2-10倍。因此,其在诊断应用中具有更大的灵活性,是微流控和POC检测的理想选择。
关于连接酶单位的定义
关于连接酶单位目前有三种定义方法:
1.Weiss单位
2.黏性末端单位(CEU)

3.d(A-T)环化单位

Weiss单位

Weiss单位最早是1968年由Weiss提出,1Weiss单位定义为:37℃下,使用指定的反应条件,在20分钟内将1 nmol的32p标准的无机焦磷酸盐转化为Norit可吸附材料(活性炭)所需的酶量。

Weiss Unit不是DNA连接的直接测量,而是酶腺苷化反应的间接测量,然后确定ATP-PPi交换。这是大多厂家使用的单位。

CEU单位
粘性末端单位(CEU)也可以作为定义连接酶的单位,这是DNA连接的直接测量。
1个CEU定义为在20µL的1X T4 DNA连接酶缓冲液中在16°C下30分钟内给予50%的Lambda DNA Hind III酶切片段连接所需的酶量。1 CEU=0.015 Weiss Unit, 或者1 Weiss Unit=67 CEU。
d(A-T)环化单位
1970年Modrich与Lehman提出了真正度量连接功能的d(A-T)环化单位,又称外切酶抗性检测。1个d(A-T)环化单位的定义为:30°C下 30分钟 内将100nmol/L的d(A-T)(约2kb长)转化成抗外切酶的形式。

虽然与Weiss单位相比,d(A-T)环化单位更接近实际,但仍有一定的问题,例如,环化单位测试中用的是纯AT片段,与实际连接中4种碱基随机排列不符;再说,如果连接酶将片段连接成多聚体而末环化时,仍可能被外切酶组所切;除此之外,与实际上大多数连接反应使用的温度16相比,30度仍显得偏高。因此,目前使用Weiss和CEU单位为主。


即使将市售的T4连接酶浓度统一为统一单位,迈迪安提供的T4连接酶依然是是目前市场上提供的浓度最高的,更有益于在反应体积有限的条件下使用。

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北京迈迪安生物科技有限公司是Meridian Bioscience在中国设立的全资子公司。Meridian BioScience (以下简称:迈迪安)是一家全球领先的生物诊断公司,总部设立在美国,距今已有45年的历史。迈迪安公司分为诊断和生命科学两个部分,在中国地区的主营业务是生命科学产品,包括各种分子和免疫诊断检测的关键原料,如抗原抗体、免疫阻断剂、PCR和LAMP反应的聚合酶和优化的预混液、核苷酸等,为人体、动物、农业、环境及食品安全等各种检测提供全面的解决方案。45年来,迈迪安已经成为全球各领域诊断企业的首选原料供应商!
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