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【推荐】你的qPCR/RT-qPCR检测结果可靠吗?

首页 » 产业 » 企业 2022-03-14 转化医学网 赞(7)
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导读
迈迪安公司提供适用于DNA和RNA检测的提取质控, 多年来该系列产品在新西兰、澳洲以及欧美的众多医院及IVD公司的诊断检测中得到多年广泛应用及好评。 

你的qPCR检测结果可靠吗?

qPCR检测用于体外诊断中要保证检测结果的可靠性和准确性,这对诊断的判断和采取及时的治疗措施非常重要。

比如说在新冠刚爆发初期,RT-qPCR检测假阴性的问题一度比较受关注,有一些阳性检出率甚至低于50%,这在重大传染性疾病防控中造成的影响是至关重大的。

常规的qPCR流程是:样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录(RNA病毒)-扩增-结果读取。

检测出现阴性结果时,例如无扩增或Ct值偏大,我们需要判断的是反应是真的没有检测的目的基因表达呢,还是某个环节出现问题了呢?

通常来说引起假阴性结果的原因可能出现在以下几个环节:

为了避免这种假阴性的发生,需要使用阳性对照来对检测的各个环节进行监控,确保qPCR/RT-qPCR检测结果的可靠性和正确性。

qPCR检测中常见对照


使用提取质控的意义

常见的阳性对照是先从样本中提取DNA/RNA,然后在进行qPCR/RT-qPCR时加入已知拷贝数的DNA或RNA内控。提取后添加内控可以监测PCR反应的扩增效率,但作为提取对照没有价值。因为它无法检测核酸提取的效率和可能残留的PCR抑制剂,因此并不能作为分子检测从核酸提取到qPCR检测步骤完整的质控。

理想的情况是,在qPCR之前,在检测样品中添加提取质控,使它们经过完全相同的处理(从核酸提取到PCR扩增),以作为阳性对照用来监控从样本提取到PCR检测的整个过程,验证结果的可信性。

有效监控样本处理和qPCR扩增的质控尤为重要。在澳洲和新西兰,IVD检测法规中已经要求必须要包括阴性和阳性对照,很多检测已经开始使用提取质控作为阳性对照,来降低假阴性结果的可能性以便提高检测的准确性和可靠性。


提取质控推荐

迈迪安公司提供适用于DNA和RNA检测的提取质控, 多年来该系列产品在新西兰、澳洲以及欧美的众多医院及IVD公司的诊断检测中得到多年广泛应用及好评。

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迈迪安可以根据客户的需求定制特定的RNA序列(最多1000nt),单个假病毒颗粒中可实现多个质控序列。

除此外,迈迪安也提供通用的、现成的质控(含匹配的引物和探针),它包含没有已知同源性的RNA序列 。


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迈迪安生物科技

是一家大规模生产各种抗体,各种病毒抗原,各种重组蛋白质,各类PCR多聚酶,各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。44年以来,迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务,使其有助于推动这些领域的发展。


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