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等温扩增Bst 2.0、Bst DNA/RNA聚合酶

首页 » 产业 » 企业 2021-11-03 转化医学网 赞(7)
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导读
Bst DNA聚合酶是等温扩增的核心酶,这是因为它具有较强的热稳定性,链置换活性和聚合酶活性,能在恒温条件下快速、高效、特异性的扩增模板,无需PCR热变性扩增循环,1小时内完成整个实验。

近岸蛋白质Bst 2.0、Bst DNA/RNA两种聚合酶产品都适用于恒温扩增。Bst 2.0聚合酶具有5´→3´聚合酶活性,缺少5´→3´核酸外切酶活性,常用于DNA模板的扩增。Bst DNA/RNA混合酶是在Bst 2.0的基础上添加反转录酶配制而成的,可用于RNA模板的扩增。


(1) 微量、高产扩增

近岸蛋白质Bst 2.0、Bst DNA/RNA聚合酶具有较强的链置换活性,突破传统聚合酶的限制,能够高效扩增富含GC的区域以便于后续的测序实验。Bst 2.0、Bst DNA/RNA能够高产扩增飞克(fg)级别的DNA、RNA,可应用于微量模板测序、非洲猪瘟浊度法肉眼观测等。



(2) 高灵敏度、特异性RT-LAMP扩增

Bst聚合酶常应用于RT-LAMP扩增以检测病原体,如病毒、衣原体、支原体、致病菌等(恒温温度:60~65℃)。Bst 2.0聚合酶能够特异性扩增DNA型的病原体,如非洲猪瘟病毒,灵敏度可达10拷贝,模板量为飞克(fg)级别。Bst DNA/RNA混合酶可以低拷贝特异性扩增RNA型的病原体,如冠状病毒,灵敏度高,模板量低至飞克(fg)级别。RT-LAMP实验引物设计网站:http://primerexplorer.jp/e/。


(3) Bst——RT-LAMP——SARS-CoV-2

自2019年岁末以来,新冠病毒确诊人数不断增加,全球疫情局势没有缓解,开发快速、准确检测SARS-CoV-2的试剂盒仍然需要。与传统的qRT-PCR相比,RT-LAMP操作步骤简单,无需高精尖仪器,1小时完成检测,灵敏度更是达到单拷贝。相关研究单位已经证实RT-LAMP可以高效、快速检测SARS-CoV-2。钟南山院士带领研发团队开发的恒温扩增芯片在15-60 min内即可完成对SARS-CoV-2的检测;哈佛医学院Constance Cepko实验室表明RT-LAMP可以检测SARS-CoV-2低至1copies/ul;韩国学者Song, Min-Suk证实,通过设计引物,RT-LAMP能够特异性扩增SARS-CoV-2,不会非特异性扩增人体常常感染的其它病原体(下图:P.C代表SARS-CoV-2样品)







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