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抗抑型免核酸提取直扩技术(PCR & LAMP)让分子诊断更简单快速

首页 » 研究 2021-08-04 转化医学网 赞(26)
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导读
分子诊断是通过检测生物体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出的诊断技术,从而达到预测及诊断疾病的目的。新冠疫情的爆发大大推动了分子诊断的发展,尤其是基于PCR技术的病原体检测因其高灵敏度和特异性成为了分子诊断市场目前的最大领域。

通常来说,PCR检测中需要先从样品中提取核酸(DNA / RNA)。如果直接对样本进行检测,样本中的PCR抑制物会降低灵敏度和准确性,因此核酸提取是移除这些PCR抑制剂的必要步骤;然而核酸提取是一个有局限性的步骤,比如:

  •   组织样本的研磨、核酸的分离和纯化步骤多、时间长,易造成样本交叉污染和/或降解

  •   增加实验的试剂、仪器和时间成本

  • DNA或RNA也有可能在提取过程中损失,降低了分子检测的灵敏度。 

如何解决这些难题,能否不经过核酸的分离提取而直接进行PCR,一直是广大科研人员及临床检验人员梦寐以求的。有没有办法实现这项技术呢?

答案是:有的!


PCR直扩技术就可以克服这一难题,被认为是PCR诞生30年来最为重要的技术拓展和创新之一。该技术无需进行核酸提取,可以用样本粗裂解液直接进行扩增,检测靶标DNA/RNA,极大程度地缩短样本检出结果的时间。PCR直扩最早应用的领域是动植物领域,比如动物的血液、组织和毛发;植物的叶片和种子等,用来研究基因分型、转基因、质粒检测、基因敲除分析、DNA来源鉴定、物种鉴定、SNP分析等领域,因为这些检测的目标基因含量较高,使用PCR直扩对结果的影响很小,而且还能节省时间和成本。迈迪安公司在很多年前就有一系列直扩PCR试剂盒专门针对这些应用(MyTaqTM Direct PCR)。


而PCR用于病原体的检测,通常是对样本中是否含有病原体进行筛查,因此对检测的灵敏度要求较高。直扩PCR面临最大的挑战是,目标基因浓度通常比较少,而不同的样本(如血液、唾液、痰液、尿液、脑脊液、粪便或植物等)又富含抑制物,会影响DNA聚合酶的结构和活性,从而降低PCR检测灵敏度和准确性。


理想的免核酸提取直扩反应对核酸扩增体系的要求很高,因为一个试剂中包含了酶、核苷酸、Mg、盐、缓冲液、增强剂和稳定剂等,需要对各组分经过复杂的优化达到平衡的配方,对于直扩型的分子试剂还额外要求具有对抑制物极强的抗干扰能力和特异扩增能力。


在研发生产分子试剂方面,迈迪安具有全球领先的科研团队和技术优势,拥有独特的优化配方可克服样本特异的抑制物, 为免核酸提取直扩提供了一系列不同的试剂研发了一系列高灵敏高特异的抗抑型直扩分子试剂,可直接对各种样本粗裂解液进行扩增,更省时省力,为POCT平台的开发提供全面的解决方案。迈迪安提供非常广泛的直扩型试剂,可根据检测DNA或RNA, 是否需要开发常温稳定型干燥检测,LAMP或PCR,不同样本类型等,均给出对应的选择:


特别指出的是,迈迪安可冻干/可风干抗抑性的试剂,除了对抑制物耐受性高的以外,还有以下几个独特的优势:

    1. 4x高浓度提供,增加了反应加样量和灵活性以提高低拷贝数的检出量,极大提高检测灵敏度

    2. 试剂以也液体形式提供,既可以直接使用,也可以通过冻干/风干用于开发常温稳定的干燥型检测,更方便快速使用,减少冷链存储的成本(转化医学网360zhyx.com)

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