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可冻干LAMP预混液-开放常温稳定的干燥型LAMP检测的理想解决方案

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导读
近十几年来,环介导等温扩增(LAMP)技术在POCT诊断中发挥了越来越重要的作用。
近十几年来,环介导等温扩增(LAMP)技术在POCT诊断中发挥了越来越重要的作用。LAMP技术主要特点是用到4-6个特异性引物,利用链置换型DNA聚合酶(例如Bst酶)在恒温条件下进行扩增反应,可在15-60分钟内获得大量的扩增产物,是灵敏度和特异性都很高的扩增方法。

与常规PCR/qPCR技术相比,LAMP 具有许多独特的优点:
(1) LAMP 技术可以在等温条件下实现扩增,不需要进行模板的预变性,减少了PCR 技术升降温带来的影响以及对昂贵、精密实验仪器的要求,同时扩增效率高,可以在1 h 内把几拷贝的目的序列迅速扩增到10 拷贝;
(2) LAMP 技术分别使用一对外部引物和一对内部引物,可以识别目的序列上6个不同的区域,对目的序列具有高度的选择性,减少了非靶标序列的影响,因此扩增的特异性非常高;
( 3 )阳性扩增反应中会产生大量的类似花椰菜结构的产物和白色焦磷酸续沉淀,扩增产物的检测方法多样,可用凝胶电泳检测、直接用肉眼检测或在反应体系中加人染料,根据颜色的变化进行检测,还可以利用浊度仪,根据扩增产物混浊度的不同对原始核酸分子进行实时定量分析。

 




 
(4)对常见的PCR抑制物耐受性更强,因此,对于某些病原体可直接利用简单处理的样本作为模板,省略繁琐的DNA/RNA 提取步骤。
LAMP 与PCR检测对比总结如下:
 
综上所述, LAMP 技术因其快速、高效、特异、灵敏和经济等优点,已经应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和转基因产品检测等领域,并且还将广泛应用于临床诊断、环境监测、食源安全等领域,是POCT检测的理想选择。
迈迪安生物科技目前已经提供一系列性能优越的Bst聚合酶 (包括无甘油可冻干的Bst酶)和免提取直扩的缓冲液。
 
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POCT分子检测在新冠疫情以来已经凸显了优势,由于检测反应可在单一温度下进行,无需传统PCR的热循环扩增仪,因此大大降低了成本和操作的复杂性。为了进一步推行POCT的发展应用,对开发常温稳定的干燥型LAMP检测需求也越来越高, 因为这可以减少冷链存储环节的成本和潜在问题。迈迪安公司新推出的可冻干LAMP预混液就是为了满足这一需求。 


  扩增更快速



使用可冻干LAMP预混液(橙色)和供应商N (蓝色)分别对阴道毛滴虫9TV10基因、人类基因组DNA hBRCA1基因和结核杆菌MTB1基因进行扩增,比较平均样本应答时间TTR。结果表明,与供应商N相比,可冻干LAMP预混液的反应速度更快,TTR更早。 反应设置为65℃ 60分钟。

  对低拷贝数样本灵敏度更高
使用可冻干 LAMP预混液(橙色)和供应商O(棕色)和供应商N(蓝色)分别对连续10倍稀释的BRCA1基因进行扩增(1000、100和10拷贝),比较平均样本应答时间TTR。结果表明,与其他供应商相比,可冻干 LAMP预混液具有更高的灵敏度和可重复性,样本应答时间TTR更快,重复样本间的标准偏差SD也更小。反应设置为65℃ 60分钟。

冻干后稳定

将冻干后的LAMP预混液和新鲜的反应液分别在在37℃保存3个月后进行对比。结果表明,在37℃的条件下,冻干过程不影响可冻干LAMP预混液的稳定性,因此可以推断冻干后混合物的稳定性可达1年。反应设置为65℃ 60分钟。

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美国迈迪安生命科学公司是一家大规模生产各种抗体,各种病毒抗原,各种重组蛋白质,各类PCR多聚酶,各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。40年以来,迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务,使其有助于推动这些领域的发展。 

 



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