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高分子量脂联素的ELISA测定

首页 » 研究 2016-11-24 R&D Systems 赞(2)
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导读
脂联素(Adiponectin)是一种来自脂肪细胞的蛋白,具有多种生物学功能。它以低分子量(LMW)三聚体、中分子量(MMW)六聚体和高分子量(HMW)多聚体的形式在血浆中循环流动。
高分子量脂联素的ELISA测定

简介

脂联素(Adiponectin)是一种来自脂肪细胞的蛋白,具有多种生物学功能。它以低分子量(LMW)三聚体、中分子量(MMW)六聚体和高分子量(HMW)多聚体的形式在血浆中循环流动。脂联素(Adiponectin)的这些寡聚形态对特定靶组织发挥着不同的作用。HMW 脂联素是一种主要的生物活性形态,具有胰岛素增敏活性。它的循环水平与肥胖、胰岛素抗性和冠心病 (CAD) 呈负相关。目前,ELISA测定HMW 脂联素需要对其进行选择性酶解成LMW和MMW 脂联素,这是一个相当费劲的过程。R&D Systems开发了使用HMW 脂联素特异性抗体的ELISA方法。这种分析非常简单易用,不需要任何样本预处理过程,而且重现性非常好。

通用方法

抗体制备

通过凝胶过滤层析从重组脂联素的不均匀混合物中纯化HMW 脂联素,用它们生成anti-HMW脂联素单克隆抗体。这些抗体经过严格的测试,确保其对HMW脂联素的特异性。两个HMW 脂联素特异性抗体进行配对以作为标准的定量夹心法酶免分析中的捕获抗体和检测抗体。

分析流程

用Quantikine® Human Total Adiponectin/Acrp30和Quantikine Human HMW Adiponectin /Acrp30 ELISA Kits测定脂联素异构体

图1.用分子排阻层析法从重组脂联素的不均匀混合物中纯化HMW、MMW和LMW脂联素异构体。分别将HMW (绿线)、MMW* (粉红线)和LMW (红线)部分、以及混合分子量脂联素(蓝线)上样TSK凝胶层析柱。分别收集各组分,并用Quantikine Human Total Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit (Catalog # DRP300;左图)和Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit (Catalog # DHWAD0;右图)进行分析。Human Total Adiponectin/Acrp30 Immunoassay检测全部三种分子量的脂联素异构体,而Human HMW Adiponectin/Acrp30 Immunoassay只检测HMW脂联素。
* MMW脂联素部分包含少量HMW脂联素。

用Quantikine Human Total Adiponectin/Acrp30和Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kits检测人血清中脂联素异构体
图2.用TSK凝胶层析柱处理低(蓝线)、高(粉红线)和超高(绿线)BMI含量的不同人类个体的血清。用Quantikine Human Total Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit (左图)和Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit (右图)对收集的组分进行分析。Human Total Adiponectin/Acrp30 Immunoassay检测所有三种分子量的脂联素异构体,而Human HMW Adiponectin/Acrp30 Immunoassay只检测HMW脂联素。此外,使用Human HMW Adiponectin/Acrp30 Immunoassay进行检查时发现不同BMI含量的血清样本中的HMW脂联素水平差异非常明显(低BMI平均值=19.8,n=4;高BMI平均值=32.8,n=4;超高BMI平均值=55.4,n=3)。

低BMI与高BMI、超高BMI的血清脂联素比值
图3.用Quantikine Human Total Adiponectin/Acrp30和Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kits在低BMI、高BMI和超高BMI个体的血清中测定脂联素水平。用这两种ELISA试剂盒的测定值计算了低BMI与高BMI个体的脂联素倍数差异(蓝色柱)、低BMI和超高BMI个体的脂联素倍数差异(绿色柱)。Human HMW Adiponectin/Acrp30 Immunoassay检测数据表明,低BMI与高BMI个体的脂联素水平相差2.4倍,低BMI与超高BMI个体的脂联素水平相差5.1倍。然而Human Total Adiponectin/Acrp30 Immunoassay检测数据表明,低BMI与高BMI个体的脂联素水平相差1.9倍,低BMI与超高BMI个体的脂联素水平相差2.9倍。(低BMI平均=19.8,n=4;高BMI平均=32.8,n=4;超高BMI平均=55.4,n=3)

分析精密度

批内(Intra-assay)精密度

批间(Inter-assay)精密度

样本

1

2

3

1

2

3

n

20

20

20

20

20

20

平均值 (ng/mL)

25.6

70.6

141

27.7

70.4

134

标准差

0.67

2.64

3.97

2.4

6.0

11.1

CV (%)

2.6

3.7

2.8

8.6

8.5

8.3

1. 在一块板上对三个已知浓度的样本进行二十次测定,由此评估板内精确度。对三个已知浓度的样本进行二十次单独分析,由此评估板间精确度。


分析线性
图4.用EDTA (粉红线)或肝素(金线)作为抗凝剂收集血浆,对这些血浆和血清(蓝线)样本进行梯度稀释,用Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit分析HMW脂联素水平。计算所有样本的稀释回收比率(血清n=4;EDTA血浆n=4;肝素血浆n=4)。

讨论

•Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit (目录号 DHWAD0)是一套完     整的、经过充分验证的即用型夹心法ELISA,为HMW 脂联素定量提供最高水平的特异性、准确性、精确度和灵敏度。

•Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit是首个无需对样本进行蛋白降解预处理的商业化HMW 脂联素 ELISA试剂盒。

•在低BMI和超高BMI个体检测脂联素表达水平,其中HMW 脂联素揭示了更大的倍数差异。这说明对于代谢综合征相关状况(比如肥胖和胰岛素抵抗)来说,HMW 脂联素水平可以成为比总脂联素水平更有用的监控指标。

•Human HMW Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit提供了一个简单、直观的测定血清和血浆中HMW 脂联素水平的方法,可用于肥胖症、二型糖尿病和冠心病研究。

(转化医学网360zhyx.com)

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